绝对蛋白质定量（Absolute Protein Quantification）是指确定生物样品中蛋白质的精确含量（质量或摩尔数）。与相对蛋白质定量（侧重于比较不同样本之间蛋白质的相对量）不同，绝对蛋白质定量提供了蛋白质实际含量的具体数值。绝对蛋白质定量的核心在于准确测量样品中目标蛋白质的绝对浓度。这一过程通常需要借助质谱技术与同位素标记相结合的方法，通过标准品与样品的比较，实现蛋白质的绝对量化。例如，在癌症研究中，精确的蛋白质定量可以揭示肿瘤细胞中特定信号通路的激活状态，从而为个性化治疗策略的制定提供依据。绝对蛋白质定量能够提供关于蛋白质浓度的精确数据，对于研究蛋白质功能、相互作用以及疾病机制等具有意义。同时，绝对蛋白质定量有助于筛选和验证药物靶点。通过准确测量药物作用前后目标蛋白质的绝对含量变化，可以确定药物是否真正作用于预期的靶点，以及评估药物对靶点蛋白的抑制或激活程度。此外，在研究细胞生理功能和信号转导机制时，绝对蛋白质定量可以揭示细胞内蛋白质含量的动态变化。例如，在研究细胞周期过程中，通过定量不同细胞周期阶段蛋白质的绝对含量，可以深入了解细胞周期的调控机制。

一、常见的绝对蛋白质定量方法

绝对蛋白质定量的实现通常依赖于多种方法与技术的组合。以下是几种常见的绝对蛋白质定量方法：

1、同位素标记相对与绝对定量（iTRAQ）

iTRAQ是一种基于同位素标记的技术，可同时对多个样品进行分析。该方法利用不同质量的同位素标签标记样品中的肽段，通过质谱分析，获得肽段的相对和绝对浓度。这种方法适用于复杂样品的多重分析，但需要较为复杂的样品前处理。

2、稳定同位素标记法（SILAC）

SILAC通过培养基中引入稳定同位素标记的氨基酸，来标记细胞内的蛋白质。标记后的蛋白质通过质谱分析与未标记的对照组进行比较，从而得到绝对定量信息。此方法具有较高的精确性和重复性，尤其适合细胞培养实验。

3、绝对定量质谱（AQUA）

AQUA方法利用已知浓度的标记肽作为内标，通过与样品中目标肽段的质谱信号比较，实现蛋白质的绝对定量。此方法灵敏度高，适用于低丰度蛋白质的定量分析。

二、技术流程

1、标准品的制备与选择

选择合适的内标是实验成功的关键。内标的选择应考虑其与目标蛋白质在性质上的相似性。

2、样品处理与酶解

样品的前处理与酶解步骤需谨慎操作，以确保样品的完整性和酶解效率。

3、质谱分析与数据处理

质谱分析需优化参数以获得高分辨率和高灵敏度的数据，数据处理时则需运用专业软件进行可靠的定量分析。

三、常见问题及技术优势

1、挑战

（1）低丰度蛋白质的检测：低丰度蛋白质因信号较弱，使定量工作变得困难。因此，需优化样品富集与质谱条件。

（2）复杂样品基质的干扰：复杂样品中存在的其它成分可能干扰目标蛋白质的信号检测，这需要通过样品纯化和选择性标记等手段加以解决。

2、优势

（1）高灵敏度与特异性：采用质谱结合同位素标记的方法，能够实现对极低浓度蛋白质的精准定量。

（2）多重样品分析能力：部分方法如iTRAQ，能够同时分析多个样品，提高实验效率。

在绝对蛋白质定量领域，百泰派克生物科技凭借其先进的技术平台和专业的技术团队，为客户提供高质量的绝对蛋白质定量服务。我们的服务不仅涵盖了从样品制备到数据分析的完整流程，而且通过定制化的解决方案，帮助客户在复杂生物体系中获取精确的蛋白质定量数据。我们致力于为客户的科研与生产提供坚实的技术支持，期待与您的合作，实现共同发展。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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