SM-102是一种氨基阳离子脂质-技术前沿-资讯-生物在线

SM-102是一种氨基阳离子脂质

作者:MedChemExpress LLC 2024-06-19T00:00 (访问量:26205)

  SM-102 是一种氨基阳离子脂质,可用于形成脂质纳米颗粒 (LNPs)。SM-102 具有更高的转染效率。SM-102 在脂质纳米颗粒传递 mRNA 治疗药物和疫苗的有效性中发挥重要作用。SM-102 (100 —— 300µM, 1 min) 浓度依赖性地抑制 GH3 细胞的erg介导的K+电流(i k (erg))。

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  生物活性

  体外研究

  脂质纳米颗粒的制备

  在这里,我们提供FDA批准的mRNA-1273(一种COVID-19 mRNA疫苗)中LNPs的脂质摩尔比例。该配方中脂质的摩尔比例为SM-102:DSPC:胆固醇:DMG-PEG 2000 = 50:10:38.5:1.5[1],RNA与脂质的重量比例为0.05 (wt/wt)。

  A. 脂质混合物制备

  1、将脂质溶解在乙醇中,制备10mg/m的储备溶液。脂质储备溶液可以存储在−20°C以便后续使用。

  注意事项1:离子化脂质通常为液体。由于其黏度,应始终称量而不是依赖自动移液器的体积。

  注意事项2:溶液中的胆固醇应保温(>37℃)以保持流动性。迅速转移胆固醇溶液以避免冷却。

  2、按照描述准备脂质混合溶液。对每毫升的脂质混合物添加: 572 µL的10mg/mL SM-102(HY-134541)、240 µL的10mg/mL胆固醇(HY-N0322)、127 µL的10mg/mL DSPC(HY-W040193) 和 61 µL的DMG-PEG 2000 (HY-112764)。彻底混合溶液以达到清澈的溶液。这个混合物含有10毫克的总脂质。

  注意事项3:脂质和比例的选择可以根据需要更改,这将影响LNP的性质(大小,多样性,有效性)以及所需的mRNA的量。

  B. mRNA制备

  1、用100 mM pH 5的醋酸钠缓冲液制备166.7 µg/mL的mRNA溶液。

  注意事项4:脂质:mRNA重量比影响包封效率。可以准备其他重量比作为替代配方,并应由用户相应调整。

  C. 混合

  有三种常用的快速混合溶液的方法:移液管混合法,漩涡混合法和微流控混合法。所有这些混合方法都可以用于各种应用。

  重要的是要注意,移液管混合方法和漩涡混合法可能产生更多的异质LNPs,并且封装效率较低,易变化。微流控设备能够以高度可控、可重复的方式进行快速混合,从而实现均匀的LNPs和高封装效率。在这些设备中,醇脂质混合物与水溶液被迅速地结合在单个流中。当两个流混合时形成LNPs,然后收集到一个收集管中。

  1、吸管混合法:

  1.1. 吸取3毫升mRNA溶液,迅速加入到1毫升脂质混合溶液中(通常使用醇脂混合物与水相缓冲液的1:3比例)。快速上下吸取20-30秒。

  1.2. 将得到的溶液在室温下孵育最多15分钟。

  1.3. 混合后,将LNPs对PBS(pH 7.4)进行透析2小时,然后使用0.2微米过滤器无菌过滤,并储存于4°C。

  2、涡旋混合法:

  2.1. 在涡旋混合器上以适中的速度涡旋3毫升的mRNA溶液。然后,迅速将1毫升的脂质混合溶液加入到涡旋的溶液中(通常使用醇脂混合物与水相缓冲液的1:3比例)。继续涡旋得到的分散体另外20-30秒。

  2.2. 将得到的溶液在室温下孵育最多15分钟。

  2.3. 混合后,将LNPs对PBS(pH 7.4)进行透析2小时,然后使用0.2微米过滤器无菌过滤,并储存于4°C。

  3、微流体混合法:

  3.1 mRNA缓冲溶液3毫升和脂质混合物溶液1毫升在微流体设备中以总流量12 mL/min混合(通常使用醇脂混合物与水相缓冲液的1:3比例)。

  注释5:可以更改流量比率和总流量等参数来进行LNPs的微调。

  3.2. 混合后,将LNPs对PBS(pH 7.4)进行透析2小时,然后使用0.2微米过滤器无菌过滤,并储存于4°C。

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