作为新兴技术，mRNA疫苗通过脂质纳米颗粒（LNP）将mRNA导入体内表达抗原蛋白，从而刺激机体产生特异性免疫反应。新冠肺炎疫情（COVID-19）爆发后，针对性的mRNA疫苗在多种疫苗类型中脱颖而出。与此同时，诸如自复制mRNA和circRNA等新型路线也逐渐走入大众视野，随着资本的大量涌入，circRNA技术迅速发展起来。

circRNA分子呈共价闭合环状结构，不含5’-Cap和3’-polyA结构，不易被RNase降解，具有较高的稳定性，因而大大延长了其半衰期，从而达到低剂量长时效的目的。此外circRNA因为不需要修饰核苷和加帽加尾等操作，所以还有相对简单的生产工艺优势。与mRNA相同，前期线性RNA的获得均来组线性化质粒的体外转录，而后根据其环化工艺的不同，circRNA的人工制备大致分为三个类型：I型内含子自剪切、Ⅱ型内含子自剪切和T4 RNA连接酶。大致流程如下：

在环化结束后，需要通过系列纯化手段对circRNA进行高纯度回收，由于不同环化方式的效率差异，RNase R的引入，有效去除未环化的线性RNA，从而达到纯化circRNA的目的。RNase R来源于大肠杆菌RNR超家族，是一种镁离子依赖性的3'—5'核糖核酸外切酶，可从3'—5'方向将RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R几乎能够消化所有线性的RNA，但不易消化环状RNA、套索结构RNA和3'端突出少于7个核苷酸的短双链RNA分子。通常用来消化线性RNA以富集circRNA或套索结构RNA。近岸蛋白经过系列验证，重磅推出高活性GMP级RNase R（目录号：GMP-E224）。GMP级产品采用药用规格原辅料生产，严格控制宿主核酸残留污染，符合GMP规范的产品生产与质量管理规程，保障生产过程及所有原辅料可追溯。

质量控制

应用实例

RNase R针对Total RNA、ssRNA及circRNA的消化实验，实验证明， RNase R可以消化绝大部分的总 RNA样品，完全消化ssRNA样品，对circRNA样品起到良好的纯化效果。

为了进一步验证RNase R对环状RNA无酶切作用，利用qPCR方式检测经RNase R（蓝色：近岸蛋白；绿色：对照品牌）消化后的总RNA样品中hsa_circKIF12a和hsa_circVapa基因的丰度变化，结果显示，与阴性组（橙色）相同，两个基因的丰度基本没有变化，而经RNase A（粉色）消化的样品中基因丰度明显下降，表明环状RNA耐受RNase R的消化。

随着序列设计的不断优化，环化工艺的进一步探索，伴随circRNA的各项技术壁垒也将会逐步打破。国外以ORNA Therapeutics和Laronde为代表，国内环码生物、科锐迈德、圆因生物等公司先后成立布局circRNA，越来越多的研发管线来满足临床治疗需求，circRNA未来可期。

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