取出SAlexa Fluor染料离心数秒，将管中干粉甩至管底。注：未离心前请勿开盖，以免造成损失。
2
SAlexa Fluor管中加入40mL DMSO用漩涡混匀仪混匀10~20s，至SAlexa Fluor全部溶解，瞬离5~10s，使溶解后的SAlexa Fluor溶液离心至管底。
3
抗体中加入1/10体积的调整缓冲液。
4
将溶解后的SAlexa Fluor加入抗体中(每0.1mg抗体中加入2mLSAlexa Fluor)，用移液枪反复吹打混匀或用漩涡混匀仪混匀10~20s。
5
将抗体与SAlexa Fluor混合物置水平摇床或旋转混匀仪，在摇动状态下室温避光反应1~2小时。
03
游离SAlexa Fluor染料的去除
1
将纯化柱下方堵头掰断，1000×g离心1 min倒掉保护液，将纯化柱移至新的收集管中。
2
将0.2 mL PBS加入管中，待全部渗入填料后，1000×g离心1min，重复2次。
3
将标记反应液加入到纯化柱填料表面。如果样品体积小于50mL，用试剂盒中的PBS补齐至50mL。上样体积最大不要超过200mL。
4
待样品渗入填料后，1000×g离心2min，收集纯化的蛋白溶液。
5
将抗体标记物4℃避光保存待用。
04
标记抗体保存
标记抗体可4℃避光保存，也可以根据需要选择加入BSA、防腐剂、甘油等成分保证产品稳定。
*推荐保存液：0.01M PBS(pH7.4) 含1%BSA,0.03%
Proclin300和50%甘油，可-20℃保存一年。
05
染料-蛋白质比率的计算
1
用PBS稀释少量标记蛋白。
2
使用路径长度为1cm的比色皿，在280nm处测量吸光度和特定染料的Amax（见附表）
3
计算蛋白质浓度
C(mg/mL)={[A280-(Amax× Cf)]/1.4}×稀释因子。
√C是染料-蛋白共轭物浓度；
√A280和Amax分别是在280nm处的吸光值以及在Amax波长处的吸光值；
√Cf是染料校正因子见附表；
√稀释因子是在光度测量时的稀释倍数
4
计算标记率的方法如下
DOL=(Amax×Mwt×稀释因子）/(ε×C)
√C是染料-蛋白共轭物浓度；
√Mwt是IgG的分子量；
√ε是染料的摩尔吸光系数见附表。
注意事项
1. NHS酯类染料对水分敏感，SAlexa Fluor需现用现配；
2. 低浓度的叠氮钠（0.02%）和10%甘油不会明显干扰蛋白质的标记。但含有氨基的溶液及大于10%甘油对抗体的标记效率有较大影响。标记前应尽量去除干净；
3. 试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒，会使液体或干粉试剂沾到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理，以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底；
4. DMSO属微毒类，对人体皮肤有渗透性，眼有刺激作用，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触。
附表
*：以nm为单位的激发波长
ε：Amax时的摩尔消光系数(M-1 cm-1)
Cf：校正系数(A280/Amax)
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SALK0003 | <